液相色谱仪流动相的选用要求包括流动相性质要求、流动相选择、流动相pH值、流动相脱气、流动相过滤、流动相贮存、卤代溶剂应特别注意的问题和HPLC用水等方面。

一、流动相脱气：

1、流动相脱气的原因：

HPLC所用流动相****预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵工作、柱分离效率、检测器灵敏度和基线稳定性，甚至无法检测。

（1）流动相中的溶解氧可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。

（2）溶解氧会引起溶剂pH变化，给分析结果带来误差。

（3）溶解氧能与某些溶剂（如甲醇和四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），导致检测灵敏度轻微降低，更重要的是在梯度洗脱时会造成基线漂移或形成鬼峰。除去溶解氧将大大提高UVD的性能。

（4）在荧光检测中，溶解氧在一定条件下会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛和酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。除去溶解氧将改善在一些荧光检测中的灵敏度。

（5）在电化学检测中（特别是还原电化学法），溶解氧的影响更大。

2、常用脱气方法：

有吹氦脱气法、加热回留法、超声波脱气法、抽真空脱气法和在线真空脱气法等。

二、流动相过滤：

所有溶剂使用前都****经0.45μm或0.22μm滤膜过滤，以除去杂质微粒。色谱纯试剂也不例外，除非在标签上标明已过滤。

用滤膜过滤时，要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。

有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或过滤不动。

水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂。否则滤膜会被溶解，溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。

对于混合流动相，可在混合前分别过滤。如需混合后过滤，有机相滤膜。现已有混合型滤膜。

三、流动相贮存：

流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因为许多有机溶剂（如甲醇和乙酸等）可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂被污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，防止氧和二氧化碳溶入流动相。

磷酸盐和乙酸盐缓冲液很容易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新过滤。

容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的容器，以除去容器底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的容器无此现象。

四、卤代溶剂应特别注意的问题：

1、卤代溶剂可能含有微量的酸性杂质，能与HPLC系统中的不锈钢反应。

2、卤代溶剂与水的混合物比较容易反应，不能存放太久。

3、卤代溶剂（如CCl4和CHCl3）等与各种醚类（如二异丙醚和四氢呋喃等）混合后，可能会反应生成一些对不锈钢有较大腐蚀性的产物，这种混合流动相应尽量不采用或新鲜配制。

4、卤代溶剂（如CH2Cl2）与一些反应性有机溶剂（如乙腈）混合静置时，会产生结晶。

总之，卤代溶剂zui好新鲜配制使用。如果是和干燥的饱和烷烃混合，则不会产生类似问题。

五、HPLC用水：

HPLC应用中要求用超纯水，如检测器基线的校正和反相柱的洗脱。